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卵白双向电泳2D-WB

时间:2021-09-23浏览次数:3771

实验技术简介
2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程为抗原卵白混淆物先经双向电泳疏散,然后将凝胶卵白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检 测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在卵白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱判定技术,可以从卵白混淆物中找到免疫原性更强的抗 原。

2D Western blot概述
2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程为抗原卵白混淆物先经双向电泳疏散,然后将凝胶卵白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在卵白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱判定技术,可以从卵白混淆物中找到免疫原性更强的抗原。

2D Western blot技术服务内容
1、卵白质抽提与定量;
2、双向电泳;
3、转膜,关闭,孵育,显示成像。



实验操作流程
1、第一项电泳(IEF),胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE。
2、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜要领可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
3、关闭, 5%脱脂奶粉或5% BSA关闭1小时(室温)或留宿(4度)。
4、一抗孵育,凭据抗体说明书选择孵育时间,通例的孵育条件是室温1小时或4渡留宿,一抗孵育后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
5、二抗孵育:凭据一抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
6、显影:将A、B底物按比例稀释混淆均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到泛起清晰的卵白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影,曝光时间需综合考虑卵白质的上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。
7、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和 2D Western blot图片分析。

送样须知,为了保证2D Western blot技术服务能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:
1、主顾提供:组织、细胞、卵白质溶液等;一抗(可交由bat365在线唯一官网登录公司代购)。
2、运输要求:干冰或液氮包装寄送,北京、长沙客户可上门取样。
     注:样本应制止种种污染和重复冻融。

2D Western blot技术服务陈诉内容
  1、卵白质定量结果及电泳上样量;
  2、原始胶片、电子图片及图片分析结果;
  3、2D Western blot完整的实验陈诉,包罗实验步骤、使用仪器和试剂等。

附:2D Western blot实验步骤
  1、2D Western blot卵白质样本制备,制备的主要原则是尽可能溶解全部卵白质,破坏卵白质与卵白质间的相互作用,制止种种滋扰物质,样品制备与IEF兼容等。
  2、双向电泳的主要步骤,第一项电(IEF),胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE。
  3、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜要领可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
  4、关闭, 5%脱脂奶粉或5% BSA关闭1小时(室温)或留宿(4度)。
  5、一抗孵育,凭据抗体说明书选择孵育时间,通例的孵育条件是室温1小时或4渡留宿,一抗孵育后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
  6、二抗孵育:凭据一抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
  7、显影:将A、B底物按比例稀释混淆均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到泛起清晰的卵白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影,曝光时间需综合考虑卵白质的上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。
  8、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。


收费尺度/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会凭据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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