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细胞荧光染料标志检测实验

时间:2021-09-26浏览次数:1794



Zenon?标志技术为制备荧光标志抗体提供了一种快速、通用且可靠的实验要领,此标志要领可利用种种荧光染料,而且起始原料可以为少少量、未纯化 (如杂交瘤细胞的培养上清液) 的抗体。 利用Zenon?标志技术标志的抗体适用于所有可使用直标抗体的应用领域。 Zenon? 标志技术的优势包罗:

● 10 分钟贴记时间
● 每个标志1– 20 微克抗体
● 与BSA及其它稳定卵白相容
● 无纯化步骤
● 灵活的抗体标










Zenon? - 标志技术如何事情

Zenon?标志技术提供一种多功效的、易于使用的要领,用于标志人和小鼠的IgG1,IgG2a和IgG2b抗体及兔IgG抗体。 特殊设计的Zenon?片段只结合一抗的Fc片段,这种快速、非共价结合要领能够迅速标志少量的一抗 (图1) Zenon?标志技术简朴高效;整个标志步骤只需 10 分钟。
 
Zenon?抗体偶联物形成后可以稳定地储存待用;在使用前需要添加非特异性IgG来关闭未结合的Zenon?片段,无需柱纯化。 Zenon?复合物因而可直接应用到样品中。
Zenon?标志技术标志的抗体与视察到的直接标志的抗体偶联物泛起相似的荧光强度或酶活性 (图 2 )。

图1. Zenon? 标志技术事情原理。 Zenon?抗体的非共价标志与微量标志试剂盒、单克隆标志试剂盒、卵白标志试剂盒的共价标志比力。 



图2. Zenon?标志技术生产出的标志抗体的亮度相当于或者比直接标志的抗体更亮。 使用别藻蓝卵白(APC)共轭标志或者使用1微克Zenon? APC复合物非共轭标志种种淋巴标志物抗体。 然后,标志的抗体用于人外周血淋巴细胞样品的染色。 制备Zenon?染色复合物时,通过提高Zenon?标志技术试剂与所用一级抗体的比例可进一步提高该复合物的亮度。

 

Zenon?标志技术: 最终标志灵活性

当您需要改变标志物颜色或者检测特定荧光是否适合您的应用或抗体时,Zenon?标志技术可提供奇特的标志灵活性。 可广泛选择的标志物、通用的标志技术,助您在流式细胞术 (图 3 ) 和荧光成像 (图 4 和 5 ) 中轻松获得差异颜色组合成的多色应用图像。


图3. 在流式细胞术中使用Zenon? 标志技术。 人外周血白细胞以下列三种抗体染色: 预先经Zenon? Alexa Fluor? 647 小鼠IgG1标志试剂盒 ( Z25008) 标志的抗CD3小鼠IgG1抗体 ( A21330 )、预先经Zenon? R-藻红卵白小鼠IgG1标志试剂盒 ( Z25055 ) 标志的抗CD4小鼠IgG1抗体 ( A21334) 和预先经Zenon? Alexa Fluor? 488 小鼠IgG2a标志试剂盒 ( Z25102 ) 标志的抗CD8小鼠IgG2a抗体 (A21338 )。 图A和图B显示:划分区别橙色荧光信号与绿色荧光信号或者红色荧光信号与橙色荧光信号,可以将细胞进行区分,证明Zenon?标志的抗体在同一样品中不会相互滋扰。 分析样品所用仪器及设置为:Coulter Elite流式细胞仪,针对藻红卵白和Alexa Fluor? 488 染料使用 488 nm引发光,针对Alexa Fluor? 647 染料使用 633 nm引发光。



 

图4. 在荧光成像中使用Zenon?标志技术。 切取厚度为 14 ?m的小鼠海马冠状切片,应用Zenon? Alexa Fluor? 488 小鼠IgG1标志试剂盒 ( Z25002 ) 标志的抗α-微管卵白抗体 ( A11126) 染色。 切片用NeuroTrace? 530/615 红色荧光Nissl染料 ( N21482 ) 复染来视察神经元胞体,用Hoechst 33258 ( H1398 , H3569, H21491 ) 染色来视察细胞核。




图5. 在荧光成像中使用Zenon?标志技术。 微管卵白和线粒体探针标志的牛肺动脉内皮细胞 微管卵白接纳Zenon? Alexa Fluor? 488 小鼠IgG2b标志试剂盒 ( Z25202 ) 标志的抗α-微管卵白小鼠IgG2b单克隆抗体检测,线粒体接纳Zenon? Alexa Fluor? 555 小鼠IgG2b标志试剂盒 ( Z25205 ) 标志抗氧化磷酸化酶复合体V亚单元α小鼠IgG2b单克隆抗体 ( A21350 ) 检测。 使用DAPI( D1306 , D3571, D21490 )给核酸染色。 



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